一文读懂ELISA：让检测So Easy!

1、双抗体夹心法测抗原（两步法）

2、双抗体夹心法测抗原（一步法）

3、双抗原夹心法测抗体

4、竞争法

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul ，轻轻混匀，酶标板加上盖 ，37℃温育120分钟。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。直接每孔加检测溶液A工作液100ul，轻轻晃动混 匀，酶标板加上覆膜，37℃温育60分钟。

3.弃去液体 ，甩干，洗板3次。每次浸泡1-2分钟，大约350-400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液100ul ，酶标板加上覆膜37℃温育60分钟，洗板5次  (方法同3) 。

5.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（时间应严格控制在10-20分钟之间，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3 -4孔梯度不明显）。

6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色) 。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

7.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液50μl，余孔分别加标准品或待测样品50μl。

2.立即在每个孔中加入检测溶液A工作液 50μl，轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜，37℃温育60分钟。

3.弃去液体 ，甩干，洗板3次。每次浸泡1-2分钟，大约350-400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干） 。

4.每孔加检测溶液B工作液100μl，酶标板加上覆膜37℃温育45分钟，洗板5次，方法同3。

5.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色。

6.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。

7.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。